红耐寒月季“MoHa ЛNЗa”的快繁技术
作者：李濛 周红昕 于新海
来源：《吉林农业·下半月》2017年第11期
        摘要：红耐寒月季“MoHa ЛNЗa”，是吉林省生物研究所从俄罗斯引进的一个全新的耐寒月季品种。本实验以“MoHa ЛNЗa”茎段为外植体，通过植物组织培养手段建立快速繁殖。该试验获得成功，丰富了东北地区耐寒花卉品种。
        关键词：俄罗斯耐寒月季“MoHa ЛNЗa”；组织培养；红耐寒月季；快速繁殖
        中图分类号： S685.12 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/jki.jlny.2017.22.023
        相较于我国南方，北方城市绿化景观水平相对较低，草花品种单一，寿命短，园林负担沉重。针对此情况，可以借鉴俄罗斯等高纬度地区城市绿化的成功经验，在寒温带城市地区绿化中引入可连续开花耐寒月季作为多年生小灌木花卉，不但观赏性高，并且抗低温效果好，因此应用前景非常广阔。
        1材料与方法
        1.1外植体建立
        材料为驯化2年的红耐寒月季“MoHa ЛNЗa”。选取带芽茎段的最好时期是5月末。材料选取当年生半木质化枝条中饱满而未萌发的侧芽。首先，将选好的枝条去叶，用牙刷蘸洗衣粉水轻轻刷洗后放入装有多菌灵的三角瓶中震荡清洗5分钟。再用流水冲洗1～2小时，剪成6～8厘米左右带腋芽的茎段。超净台上，将茎段先用70%酒精溶液浸泡1分钟，再置于0.1%的溶液中消毒12分钟，然后用无菌水冲洗4次，滤纸吸干后接种。
        1.2离体芽诱导培养
        将无菌茎段分别接种于不同配方培养基上诱导萌芽。诱导培养基以MS为基本培养基，加入不同浓度的细胞分裂素和生长素。后用正交法添加不同剂量的6-BA与不同浓度的NAA进行配比试验。组成4种培养基：第一种MS+6-BA0.50mg/L+
        NAA0.10mg/L、第二种MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.20mg/L、第三种MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10mg/L、第四种MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.20mg/L。每种培养基均接种2到3个无菌茎段，培养2周后统计离体芽诱导率。
        1.3丛生芽继代增殖培养
        将诱导培养基上已萌发的“MoHa ЛNЗa”嫩芽切下转接到4种不同浓度的细胞分裂素和生长素的继代培养基中进行继代增殖培养。继代培养基为：第五种MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L、第六种MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10mg/L、第七种MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.20mg/L、第七种MS+6-BA1.00mg/L+NAA.20mg/L。每种培养基接入3～5株嫩芽，接种时单芽茎段长1厘米至2厘米左右，培养4周后统计丛生芽的数量以及高于1厘米的芽数。
        1.4试管苗壮苗培养
        将生长旺盛的丛生苗切成单株接入到2种不同配方的壮苗培养基中培养，每瓶接10～15株。4周后统计试管苗的生长情况。组成2种壮苗培养基为：第九种MS+NAA0.10mg/L、第十种MS+NAA0.20mg/L。
        1.5试管苗生根培养
茉奈佳奈        将生长键壮，高度为5厘米左右的试管苗接入到生根培养基中。
        每种培养基接入5～10个单株，接种15天后统计生根情况。
        2结果与分析
        2.1离体牙的诱导结果
        离体芽的诱导很快，接种7天后离体芽开始萌动，芽萌动后培养3周后，结果显示：第一种的培养基离体芽少，出芽率为75%；第二种的出芽率为100%，离体芽生长细弱；第四种的离体芽萌动后产生愈伤组织；第三种出芽率为100%，且生长健壮。 反复试验，结果表明：适合离体芽诱导的培养基为：第三种。
        2.2丛生芽继代增殖结果
        耐寒月季“MoHa ЛNЗa”在4种继代增殖培养基中培养4周后，芽的增殖倍数和大于2厘米芽的比率存在着差异。其中第六种和 第八种两种培养基，增殖的丛生芽数量多，且生长健壮，芽的增殖倍数分别为2.16倍和3.3倍，高于2厘米的芽占75.%和71.7%，明显高于其他培养基。
        第五种的培养基中，丛生芽生长细弱，高于2厘米的芽仅占18.25%；第七种的培养基中，继代芽产生愈伤组织。
        反复试验，结果表明：适合“MoHa ЛNЗa”繼代增殖的培养基为第六种。
        2.3试管苗壮苗培养
        将生长旺盛的丛生苗切单株接入2种培养基培养4周后统计试管苗的生长情况。结果显示：第九种培养基中试管苗有70%生长健壮，30%有分化情况；第十种培养基中试管苗100%生长键壮。
        反复试验，结果表明：适合“MoHa ЛNЗa”试管苗壮苗培养基为第十种。
        2.4 试管苗的生根培养结果
        将生长粗壮的耐寒月季接入到生根培养基上培养10天后开始长出白的根，根系发达，粗壮，叶片深绿，长势良好，生根率达为95%，平均根长位1.5厘米和2.5厘米。
        3 结论
        经过两年的试验，建立了俄罗斯耐寒月季“MoHa ЛNЗa”的组培快繁体系，组培苗能够在长春地区露地安全越冬，其越冬成活率在80%以上。该研究的结果给规模化繁殖提供了可行性，极大地保存和丰富了东北地区耐寒花卉品种。
        参考文献
        [1]王军娥.牡丹组织培养技术的研究[D].西北农林科技大学. 2008
        [2]C. Leifert，Helen Camotta，W. M. Waites.Effect of combinations of antibiotics on micropropagated Clematis， Delphinium， Hosta， Iris and Photinia[J] 1992，Plant Cell， Tissue and Organ Culture（02）：153-160.
        作者简介：李濛，硕士，助理研究员，研究方向：生物工程。