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任国谱
２
山东
济南２．
湖南亚华乳业博士后工作站
４１０１１６）
摘 要
经离心过滤后
于５４０ｎｍ下测定其ＯＤ
值
关键词
三
ＲＥＮ Ｇｕｏ－ｐｕ
２
Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１０１１６，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ
ｂｉｕｒｅｔ ｒｅａｃｔｉｏｎ
ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅｓ
中图分类号
Ａ 文章编号
２００４－０６－０２
作者简介
男
研究方向为微生物酶技术
但不同蛋白
质由于其氨基酸组成和空间结构不同
明星电影近代研究表明
而大都是以寡肽的
形式吸收［２］
水解蛋白质生产多肽产品正成为当
今研究的热门课题之一控
制蛋白质的水解程度尽可
能多的得到目标产物多肽
这就要
求建立一种能快速测定水解液中多肽含量的有效方法
三法
［３］
是其中常用的一种
继而以微量凯氏定氮法测定上清液中
可溶性氮的含量
再与样品中的总氮量相比
此法中微量凯氏定氮法测定的是水解液中可溶
性总氮的含量便可测定其中含二个（包括二个）以上肽键的多肽的含量［４
本文利用１０％的三沉淀样品水解液中的大分
子蛋白质在上清液中加入双缩脲试
剂
继而在Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ａｒｇ
四肽标准曲线上查出样品中的多肽含量
2005, Vol. 26, No. 7
食品科学
Ｓｉｇｍａ公司
５Ｈ２
Ｏ
氨水
分
析纯
杭州三叶生物化工厂 ２０００Ｕ／ｇ Ｎｏｖｏｚｙｍｅ
１．１．２
主要仪器和设备
（１） 紫外可见分光光度计
北京瑞利
分析仪器公司
ＬＤ５－２Ａ
型
ＢＯ２２０
型
（４）
最新娱乐新闻tom电子分析天平
ＰＨ
计
ＭＥＴＴＬＥＲ ＴＯＬＥＤＯ公司
取２．５ｍｌ
样品溶液
于漩涡混合
仪上混合均匀然后在４０００ｒ／ｍｉｎ下离心
１５ｍｉｎ
并用５％的ＴＣＡ
定容至刻度然后取６．０ｍｌ上述溶液置
另一试管中
Ｖ／Ｖ）
静置
１０ｍｉｎ
取上清液于５４０ｎｍ下测定ＯＤ
值
进
而可求得样品中多肽含量
用５％的ＴＣＡ依次配制０．０
０．４
０．８
１．２
１．６和１．８ｍｇ／
ｍｌ的Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ａｒｇ
四肽标准溶液
加入４．０ｍｌ双缩脲试剂
静置
１０ｍｉｎ取上清
液于５４０ｎｍ下测定ＯＤ值（以第一管做空白对照）
ＯＤ值为纵坐标
Ｙ
得到回归方程
ｙ＝０．３６８１ｘ＋０．００１３
２．２
沉淀反应的温度和时间对测定结果的影响
称取３０．００ｇ
全脂奶粉加
入胰酶
０．６０００ｇ（Ｅ／Ｓ＝２％
于温度
３８
水解
３０ｍｉｎ
后
灭酶处理
１０ｍｉｎ
）
６０７０８０９０１００室温ＯＤ值
０．４５０
０．４４９
０．４４６
０．４４０
０．４４５
０．４４２
表１ 反应温度对测定结果的影响
Ｔａｂｌｅ １ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ＯＤ反应时间（ｍｉｎ）
０３０６０９０１２０１５０ＯＤ
０．４４３
０．４４２
０．４４２
０．４４２
０．４４１
０．４４１
表２ 反应时间对测定结果的影响
Ｔａｂｌｅ ２ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｒｅｓｕｌｔｓ测定值（ｍｇ／ｍｌ）
理论值（ｍｇ／ｍｌ）
回收率（％）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ａｒｇ
３．９８
０．７５Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ａｒｇ＋全脂奶粉
３．７５
１．３
表３ 标准肽的回收率
Ｔａｂｌｅ ３ Ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ ｐｅｐｔｉｄｅ
冷却至室温准确量取５０．０ｍｌ水解液
２．２．１
反应温度的影响
取六支试管
再加入４．０ｍｌ １０％的ＴＣＡ
７０
９０和
１００
于室温下放置
１５ｍｉｎ
平行测定一次
由上表可以看出但各
组所测得的ＯＤ
值大体一致反应温度对测
定结果的影响不是很明显而让
其在室温下反应
分别加入上述溶液
４．０ｍｌ于振荡器上混合均匀
李小冉鄢颇３０９０
继而按标准程序测
定ＯＤ
值
结果见表２
反应时间对测定结果几乎没有影
响
反应速度很快而无
需等待
按
标准程序测定其中多肽含量
结果见表
171
ÓëÀíÂÛÖµ¼¸ºõÍêÈ«ÎǺÏ
0.75%
°´±ê×¼³ÌÐò²â¶¨ÆäÖжàëĺ¬Á¿
½á¹û¼û±í3 1.3%
ÕâÔÚºóÐøÊÔÑéÖÐ
½«ÓÐËùÉæ¼°
°´
Ïàͬ³ÌÐò½øÐÐ6ÂÖƽÐвⶨ
½á¹û¼û±í4
高冈苍佑
´ó¶¹µ°°×·ÛºÍ´ó¶¹ëÄÑùÖеĶàëĺ¬Á¿
Ｔａｂｌｅ ５ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｗｈｏｌｅ ｍｉｌｋ ｐｏｗｄｅｒ， ｓｏｙｂｅａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ
ｐｏｗｄｅｒ ａｎｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｐｅｐｔｉｄｅｓ
精密度Ｓｗ
＝（标准偏差Ｃｖ＝［（Ｓｗ／ｘ）平均
j twins值为３．９９ｍｇ／ｍｌ
大豆蛋白粉和大豆肽样中的多肽含
量
将１０％
的全脂奶粉１０％的大
豆分离蛋白
结果见表５
乳钙（５０
葡萄糖酸锌（２３０焦磷酸铁（３００
分别配制含相应浓度钙铁锌离子的Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ａｒｇ四肽溶液（四肽浓度的理论值为４．０ｍｇ／ｍｌ）
测定轮数
ｘｉ１ｘｉ２ｄｉ＝ ｘｉ１－ ｘｉ２
ｄｉ２Ｓｉ２１３．９５４．００－０．０５０．００２５０．００１２５２３．９５３．９５０．０００．０００００３４．００４．１０－０．１００．０１０００．００５４４．０５３．９５０．１００．０１０００．００５５３．９５４．００－０．０５０．００２５０．００１２５６
４．００
３．９５
０．０５
天上西藏０．００２５
０．００１２５
由表５
可以看出
大豆蛋白粉溶液则使得体系ＯＤ值偏高
不同厂家的产品之间也有差异
溶于２００ｍｌ蒸馏水中
于温度５０
每隔１５ｍｉｎ
取样一次结果见表６
钙铁锌离子的存在对样品溶液中多肽
含量的测定是有影响的
这就可以解释为什么不同奶粉溶液的ＯＤ值有差异了
标样回收率
９９．５％
１．３％标准偏差
１．２％
１．８ｍｇ／ｍｌ不同蛋白质原料未水解时的水
溶
液
但数据较
小
原料中含有钙铁锌离子时并且铁离子的影响比钙和锌离子稍
显著
［１］江志炜， 沈蓓英， 潘秋琴． 蛋白质加工技术［Ｍ］． 北京： 化学工业出版社， ２００２．
［２］
豆类蛋白资源研究组编． 豆类蛋白质资源开发与利用［Ｍ］．农业出版社， １９９１．
［３］郭兴凤． 蛋白质水解度的测定［Ｊ］． 中国油脂， ２０００， ２５（６）：１７６－１７７．
［４］蔡武成，袁厚积． 生物物质常用化学分析法［Ｍ］． 北京： 科学出版社， １９８２． ９５－９６．
［５］沈同， 王镜岩． 生物化学（上册）［Ｍ］． 北京： 高等教育出版社， １９８９． １１４．
［６］
陈曾燮， 刘兢， 罗丹． 生物化学实验［Ｍ］． 安徽： 中国科学技术大学出版社， １９９４．
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