[收稿日期]2021-11-11　[修回日期]2022-04-13[基金项目]蚌埠医学院科技发展基金项目(BYKF1810)
[作者单位]1.蚌埠医学院病理学教研室，安徽蚌埠233030；蚌埠
医学院第一附属医院2.病理科,3.核医学科，安徽蚌埠
233004
[作者简介]姚　楠(1979-)，女，硕士，讲师.
[文章编号]1000⁃2200(2023)05⁃0570⁃04
㊃基础医学㊃
PIK3R1在人原发性肝细胞癌中的表达
及其与肿瘤上皮间质转化关系
姚　楠1,2，孙景秋3，郭冰沁1,2，武世伍1,2
[摘要]目的：探讨磷脂酰肌醇⁃3激酶调节亚单位1(PIK3R1)在人原发性肝细胞癌(HCC)中的表达水平及其与
恶性肿瘤上皮间质转化的相关性㊂方法：选取80例HCC 病人癌组织及相应癌旁组织，通过免疫组织化学染法检测HCC 组织及相应癌旁组织中PIK3R1编码蛋白(PIK3R1/p85α)表达，并检测HCC 组织中EMT 相关蛋白转化生长因子β(TGF⁃β)㊁上皮性钙黏蛋白(E⁃cadherin)表达，评估其表达与HCC 病人临床特征的相关性㊂结果:PIK3R1/p85α在HCC 组织中的阳性率为70.0%(56/
80)，高于癌旁组织的17.5%(7/40)(P <0.05)；不同组织分化程度HCC 病人的PIK3R1/p85α㊁E⁃cadherin 和TGF⁃β表达差异均有统计学意义(P <0.05~P <0.01);HCC 组织中PIK3R1/p85α与E⁃cadherin 表达呈明显负相关关系(r =-0.323,P <0.01)，与TGF⁃β表达呈正相关关系(r =0.247,P <0.05)；无侵袭转移HCC 病人和有侵袭转移病人的PIK3R1/p85α蛋白表达差异有统计学意义(P <0.05)㊂结论:PIK3R1在HCC 组织中表达水平升高，高水平PIK3R1可能会促进肿瘤上皮间质转化的发生，并与HCC 不良预后有关㊂
[关键词]原发性肝细胞癌；磷脂酰肌醇⁃3激酶调节亚单位1；上皮间质转化
[中图法分类号]R 735.7  　[文献标志码]A  　DOI :10.13898/jki.issn.1000⁃2200.2023.05.003
Expression of PIK3R1in human primary hepatocellular
carcinoma and its correlation with epithelial mesenchymal transformation
YAO Nan 1,2,SUN Jing⁃qiu 3,GUO Bing⁃qin 1,2,WU Shi⁃wu 1,2
(1.Department of Pathology ,Bengbu Medical College ,Bengbu Anhui 233030;2.Department of Pathology ,
3.Department of Nuclear Medicine ,The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College ,Bengbu Anhui 233004,China )[Abstract ]Objective :To investigate the expression level of phosphatidylinositol⁃3kinase regulatory subunit 1(PIK3R1)in human primary hepatocellular carcinoma(HCC)and its correlation with epithelial mesenchymal transformation of malignant tumor.Methods :
The expression levels of PIK3R1coding protein(PIK3R1/p85α)in HCC tissues and corresponding adjacent tissues of 80HCC patients were detected by immunohistochemical staining.The expression levels of EMT⁃related proteins transforming growth factor β(TGF⁃β)and epithelial cadherin(E⁃cadherin)in HCC tissue were detected,and the correlation of the expression with clinical characteristics of HCC patients was evaluated.Results :The positive rate of PIK3R1expression in HCC tissue(70.0%)was significantly higher than that in corresponding adjacent tissue(17.5%)(P <0.05).The differences of the expression of PIK3R1/p85α,E⁃cadherin and TGF⁃βin HCC patients with different levels of tissue differentiation were statistically significant (P <0.05to P <0.01).The expression of PIK3R1/p85αwas negatively correlated with E⁃cadherin expression(r =-0.323,P <0.01),and positively c
orrelated with TGF⁃βexpression in HCC tissue (r =0.247,P <0.05).The difference of the protein expression of PIK3R1/p85αbetween non⁃invasive metastatic and invasive metastatic HCC patients was statistically significant(P <0.05).Conclusions :The expression level of PIK3R1in HCC tissue increases.The high level of PIK3R1may promote the epithelial mesenchymal transformation of tumors,and be associated with the poor prognosis of HCC.
[Key words ]primary hepatocellular carcinoma;phosphoinositide⁃3⁃kinase regulatory subunit 1;epithelial⁃mesenchymal translation  　原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全球五大恶性肿瘤之一，其死亡率位居全球恶性肿瘤的第二位[1]，病人检测发现时往往已经是
晚期，肿瘤发生转移㊂近年来针对肝细胞癌诊断和的研究较多，但肝癌病人的总体预后仍然较差㊂肿瘤的侵袭和转移取决于多方面因素，上皮间质转化(EMT)及多种信号通路都参与其中，目前，针对EMT 和PI3K /AKT 信号通路之间的相互关系尚未完全阐明㊂本研究针对肝细胞癌中EMT 相关蛋白转化生长因子β(TGF⁃β)㊁上皮性钙黏蛋白(E⁃cadherin)和PI3K /AKT 信号通路中磷脂酰肌醇⁃3激酶调节亚单位1编码蛋白(PIK3R1/p85α)表达进行
测定，并分析其相关性，以期为中晚期肝细胞癌提供科学依据㊂现作报道㊂
1　资料与方法
1.1　一般资料　收集2010-2015年我院病理科80例HCC肿瘤组织和相应癌旁组织㊂其中男61例，女19例；年龄26~79岁㊂按照Edmondson⁃Steiner分级法分为四级，将其中Ⅰ~Ⅱ级定义为低级别，共33例,Ⅲ~Ⅳ级定义为高级别，共47例；大肝癌63例，小肝癌17例㊂所有病例均明确肝细胞癌病理诊断，并完善随访资料，行肝癌根治切除术前，未接受术前辅助化疗㊁放疗㊁靶向或免疫㊂
1.2　试剂　兔抗人单克隆p85α抗体(工作浓度1: 100)㊁兔抗人多克隆E⁃cadherin(工作浓度1∶100)㊁兔抗人多克隆TGF⁃β抗体(工作浓度1∶100)均购自美国Santa Cruz公司，链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)试剂盒及DAB显试剂盒购自福州迈新公司㊂PAS染液为蚌埠医学院第一附属医院病理科配制㊂
1.3　方法　组织采用10%中性甲醛固定，石蜡包埋㊂4μm切片，常规脱蜡㊁水化㊁3%H2O210min阻断内源性过氧化物酶，高温高压修复10rain，加入一抗后，按试剂盒说明书进行免疫组织化学染操作㊂DAB显，苏木精复染㊂采用已知阳性片作为对照组，以PBS代替一抗作为空白对照组㊂
1.4　结果判定　p85α蛋白均定位于细胞质，以颗粒状或片状着棕黄为阳性㊂E⁃cadherin主要定位于细胞膜，有时表现为细胞质和细胞膜均着，染呈棕黄㊂TGF⁃β定位在细胞质中，染呈黄或棕黄㊂采取二次计分法，每例标本随机选取10个高倍视野(×400)，计数每个高倍视野中阳性细胞所占百分比计分㊂(1)按染强度评分：无为0分，淡黄为1分，棕黄为2分，棕褐为3分㊂(2)按阳性细胞百分比计分：阳性细胞数<10%为0分，阳性细胞数10%~30%为1分,>30%~50%为2分,>50%~75%
为3分,>75%为4分㊂将两项得分结果相乘:≤1分为阴性,>1分为阳性㊂免疫组织化学标记结果由两位病理医师采用独立双盲法判定㊂
1.5　统计学方法　采用χ2检验和Spearman相关分析㊂
2　结果
2.1　PIK3R1/p85α在HCC及癌旁组织中的表达比较　PIK3R1/p85α在HCC组织中的阳性率为70.0%(56/80)(见图1)，高于癌旁组织中的17.5% (7/40)(χ2=29.47,P<0.
05)㊂
2.2　不同临床特征HCC病人PIK3R1/p85α和E⁃cadherin㊁TGF⁃β表达比较　不同组织分化程度HCC 病人的PIK3R1/p85α㊁E⁃cadherin和TGF⁃β表达差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01)，而不同性别和肿瘤直径病人的PIK3R1/p85α㊁E⁃cadherin和TGF⁃β表达差异均无统计学意义(P>0.05)(见表1)㊂
　表1　不同临床病理特征HCC病人PIK3R1/p85α㊁E⁃cadherin和TGF⁃β表达比较(n)
临床特征n
p85α
阳性
χ2P
E⁃cadherin
阳性
χ2P
TGF⁃β
阳性
χ2P
分化程度
　低
　高
33
47
19
37  4.13<0.05
23
19  6.66<0.01
9
3619.17<0.01性别
　男
　女
61
19
43
130.03>0.05
31
单小源110.29>0.05
35
100.13>0.05肿瘤直径
　≤3cm
　>3cm
17
63
14
42  1.57>0.05
6
36  2.56>0.05
10
350.06>0.05 2.3　HCC组织中PIK3R1/p85α与E⁃cadherin㊁TGF⁃β表达的相关性　Spearman相关分析显示, HCC组织中PIK3R1/p85α与E⁃cadherin表达呈明显负相关关系(r=-0.323,P<0.01)，与TGF⁃β表达呈正相关关系(r=0.247,P<0.05)㊂
2.4　HCC组织中PIK3R1/p85α表达与肿瘤侵袭转移的关系　将收集的病例分为无侵袭转移组(无脉管侵犯及随访无复发转移)66例和有侵袭转移组(有脉管侵犯或术后有复发转移)14例，结果显示,2组p85α蛋白表达差异有统计学意义(χ2=
3.87, P<0.05)㊂
3　讨论
  在我国,HCC发病率和死亡率均排在消化系统恶性肿瘤的首位㊂临床上发现时多为晚期，虽然近年来手段多样化，但病人5年生存率仍较低㊂统计[2]发现，若肝细胞癌发生肝外转移，病人5年生存率仅为4%㊂肝癌预后差主要是因为肿瘤细胞易发生转移㊂肿瘤的转移机制与多种因素有关，其中肿瘤细胞的EMT及多种信号通路的参与是近期研究的热点㊂
EMT是指上皮细胞在特定条件下向间充质细胞转化的现象㊂在这个过程中上皮细胞骨架发生重排㊁细胞外基质重塑，形态从原来的上皮样转变为梭形或星芒状，排列上也从紧密黏附的铺路石样变为弥散性排
列，随着黏附性降低，肿瘤细胞的运动和侵袭能力显著增强，从而更容易从原发病灶脱离，进入末梢血管或淋巴系统[3]㊂在此期间，肿瘤细胞会出现上皮细胞标志性蛋白表达减少，而间充质细胞标志性蛋白表达增加㊂现有实验[4]结果已证实，在肝细胞癌的侵袭转移过程中存在EMT，但其具体机制尚不明确㊂本实验中，我们选取已证实的EMT相关蛋白E⁃cadherin[5]和TGF⁃β[6]进行验证，发现在HCC组织中，不同组织分化程度病人的E⁃cadherin 和TGF⁃β表达差异均有统计学意义㊂
三磷酸肌醇激酶作为一种细胞内的磷脂酰肌醇激酶，可以通过结合定位于质膜的受体而激活，并产生磷脂酞肌醇⁃3,4,5⁃三磷酸，其与蛋白激酶B结合，进而启动PI3K/AKT信号通路[7-8]，调节肿瘤细胞的增殖和凋亡㊂作为PI3K的调节亚单位,p85亚基又是由p85α(PIK3R1)和p85β(PIK3R2)这两个密切相关的蛋白组成[9-10]㊂其中PIK3R1是PI3K 信号通路的关键基因[11]㊂有研究表明，该基因和其编码的蛋白p85α，在多种恶性肿瘤如前列腺癌㊁肝细胞癌中,PIK3R1/p85α表达明显高于正常肝组织[12-13]㊂但PIK3R1与肝癌尤其是HCC侵袭转移之间的关系尚未完全阐明㊂有研究表明,PIK3R1的下调可以导致HCC细胞生长抑制，这可能与细胞周期G2/M期细胞停滞和细胞凋亡增强有关[14-15]㊂本组实验通过对80例HCC及癌旁组织进行p85α蛋白表达检测，发现HCC组织中PIK3R1/p85α表达高于癌旁组织，且不同组织分化程度HCC病人的PIK3R1/p85α表达差异有统计学意义㊂
目前，针对PIK3R1在肿瘤细胞EMT中的作用研究仍较少，尚未明确两者之间的作用机制，尤其在HCC中，其与肿瘤EMT之间的关系目前还是盲区㊂有研究表明,TGF⁃β可以通过调节肿瘤坏死因子受体相关因
子6的活性激活PI3K/AKT信号通路㊂TRAF6可诱导p85多聚泛化，从而促进前列腺癌细胞的侵袭性[16]㊂本实验结果显示,HCC组织中PIK3R1与TGF⁃β表达呈正相关关系，与E⁃cadherin 的表达呈负相关关系㊂
综上,HCC组织中PIK3R1过表达可能参与诱导EMT的发生,PIK3R1的上调与HCC的发生和恶性发展有关㊂
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[收稿日期]2022-01-13　[修回日期]2022-08-29
[基金项目]国家自然科学基金资助项目(81970313)；安徽省重点
研究和开发计划(1804h08020246)；优秀青年科学基金项目(2019byyfyyq)
[作者单位]1.蚌埠医学院第一附属医院心血管内科，安徽蚌埠
233004;2.蚌埠医学院心脑血管病研究中心，安徽蚌埠233030
[作者简介]刘薇薇(1994-)，女，硕士，住院医师.
[通信作者]张宁汝，硕士研究生导师，主任医师，副教授.E⁃mail:
757857199@qq
[文章编号]1000⁃2200(2023)05⁃0573⁃05
㊃临床医学㊃
心房颤动病人血清SLC7A11㊁FGF23水平检测及临床意义
刘薇薇1，卢园园1，冷俊杰1，高　崎1，康品方1,2，张宁汝1
[摘要]目的：检测心房颤动(AF)病人与窦性心律者血清溶质载体家族7成员11(SLC7A11)㊁血清成纤维细胞生长因子23(FGF23)的水平，分析二者与AF 之间的相关性及临床意义㊂方法：选取住院的AF 病人118例作为观察组，根据相关指南分为阵发性AF 组67例和非阵发性AF 组51例㊂对照组选取窦性心律健康者96名㊂选择酶联吸附免疫实验法(ELISA)测出血清中SLC7A11㊁FGF23浓度；比较3组病人的临床资料及血清学指标，利用Pearson 相关性分析血清SLC7A11㊁FGF23水平与超声心动图中左房内径(LAD)㊁左室舒张内径(LVD)㊁左心室射血分数(LVEF)和左心室缩短分数(FS)相关性㊂采用多元logsitic 回归分析AF 病人AF 发生持续相关因素㊂结果：与对照组相比，血清SLC7A11在阵发性AF 组和非阵发性AF 组均下降(P <0.01)，且非阵发性AF 组中SLC7A11低于阵发性AF 组(P <0.01)，血清FGF23在阵发性AF 组和非阵发性AF 组均升高(P <0.01)，且非阵发性AF 组中FGF23高于阵发性AF 组(P <0.01);Pearson 相关性分析显示,LAD 与血清SLC7A11呈负相关关系(r =-0.534,P <0.01)，与血清FGF23呈正相关关系(r =0.532,P <0.01)㊂多元logsitic 回归分析结果显示,SLC7A11是AF 独立的保护因素(OR =0.231,P <0.01)，而FGF23是独立危险因素(OR =1.097,P <0.01)㊂结论:SLC7A11㊁FGF23可能与AF 的发病㊁进展有关㊂
[关键词]心房颤动；血清溶质载体家族7成员11；血清成纤维细胞生长因子23
[中图法分类号]R 541.75  　[文献标志码]A  　DOI :10.13898/jki.issn.1000⁃2200.2023.05.004
Detection and clinical significance of serum SLC7A11and FGF23levels in patients with atrial fibrillation
LIU Wei⁃wei 1,LU Yuan⁃yuan 1,LENG Jun⁃jie 1,GAO Qi 1,KANG Pin⁃fang 1,2,ZHANG Ning⁃ru 1
(1.Department of Cardiology ,The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College ,Bengbu Anhui 233004;
2.Heart and Cerebrovascular Disease Research Center ,Bengbu Medical College ,Bengbu Anhui 233030,China )
[Abstract ]Objective :To detect the levels of serum solute carrier family 7member 11(SLC7A11)and serum fibroblast growth factor 23(FGF23)in patients with atrial fibrillation (AF)and sinus rhythm,and analyze the correlation between them and AF and their
clinical significance.Methods :A total of 120AF patients who were hospitalized were selected as observation group.According to relevant guidelines,they were divided into paroxysmal AF group (70cases)and non⁃paroxysmal AF group (50cases).In the control g
  　roup,96healthy patients with sinus rhythm were selected.The
concentrations of SLC7A11and FGF23in serum were measured by enzyme⁃linked immunosorbent assay (ELISA).The clinical data and serological indexes of the three groups were compared,and the correlation between serum SLC7A11and FGF23levels and left atrial diameter (LAD ),left ventricular diastolic diameter (LVD),left ventricular ejection fraction (LVEF)and left ventricular shortening fraction (FS)in echocardiography was analyzed by Pearson c
orrelation
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(本文编辑　卢玉清)