(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911163714.3
(22)申请日 2019.11.25
(71)申请人 澳美制药（苏州）有限公司
地址 215000 江苏省苏州市高新区通安镇
新振路186号
(72)发明人 曹丽丽　孙娟　欧明鸿　
(74)专利代理机构 深圳中一联合知识产权代理
有限公司 44414
代理人 方良
(51)Int.Cl.
G01N  30/02(2006.01)
G01N  30/06(2006.01)
G01N  30/34(2006.01)
G01N  30/32(2006.01)
G01N  30/30(2006.01)
G01N  30/74(2006.01)
(54)发明名称
苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法
(57)摘要
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一
种苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法。所
述检测方法采用高效液相谱测定，所述高效液
相谱为反相液相谱，谱条件包括：采用碳
载量≤15％、且比表面积≥450m 2/g的谱柱，待
测样品溶液的溶剂为乙腈。该检测方法对苯磺贝
他斯汀中基因毒性杂质具有很好的分离效果，且
灵敏度高，稳定性好，
具有很好的实用性。权利要求书1页  说明书9页  附图1页CN 111307958 A 2020.06.19
C N  111307958
A
1.一种苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法，所述检测方法采用高效液相谱测定，其特征在于，所述高效液相谱为反相液相谱，谱条件包括：采用碳载量≤15％、且比表面积≥450m 2/g的谱柱，待测样品溶液的溶剂为乙腈。
2.如权利要求1所述的苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述谱条件还包括：流动相采用磷酸溶液和乙腈的混合溶液，且所述磷酸溶液与乙腈的体积比为(65-55):(35-45)。
3.如权利要求2所述的苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述磷酸溶液与乙腈的体积比为60:40。
4.如权利要求2所述的苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述磷酸溶液中磷酸的体积百分比为0.08％-0.12％。
5.如权利要求2所述的苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.8-1.2ml/min。
6.如权利要求1所述的苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述谱柱包括GL  sciences  Inertsil  ODS -3 C18谱柱。
7.如权利要求1所述的苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述谱柱的柱温为25℃-35℃。
8.如权利要求1所述的苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述检测方法中的检测器检测波长为216nm。
9.如权利要求1所述的苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述基因毒性杂质包括苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯中的至少一种。
10.如权利要求1-9任一项所述的苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：
将苯磺贝他斯汀样品溶解在乙腈中，得到供试品溶液；
将苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯对照品溶解在乙腈中，得到对照品溶液；将所述供试品溶液和对照品溶液注入液相谱仪中，采用所述谱条件进行检测。
权　利　要　求　书1/1页CN 111307958 A
苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法
技术领域
[0001]本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法。
背景技术
[0002]斯汀类药物是一种强效、长效、高选择性的组胺H1受体阻断剂，并且对中枢神经系统的胆碱能受体无抑制作用，无镇静和嗜睡作用，日渐成为过敏性鼻炎的一线非激素药物。苯磺贝他斯汀是贝他
斯汀的苯磺酸盐，为白至类白的结晶性粉末，在其合成工艺中由于醇类溶剂的使用，可能有苯磺酸酯类的基因毒性杂质的产生，因此，对苯磺酸酯类基因毒性杂质的含量控制，具有非常重要的意义。
[0003]现有专利CN107782832A中，采用HPLC法、并用梯度洗脱方式，可有效分离苯磺贝他斯汀中潜在基因毒性杂质，该专利中使用的溶剂为体积分数为50％的乙腈溶液；经本发明人试验研究：该条件下苯磺酸异丙酯室温放置不稳定(苯磺酸酯类杂质在乙腈-水溶液中进行酯的酸水解反应导致其杂质不稳定)，3h时苯磺酸异丙酯降至9.1％。
[0004]因此，现有技术有待改进。
发明内容
[0005]本发明的目的在于提供一种苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法，旨在解决现有苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测不稳定，从而造成灵敏度差的技术问题。[0006]为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：shelly佳
[0007]本发明提供一种苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法，所述检测方法采用高效液相谱测定，所述高效液相谱为反相液相谱，谱条件包括：采用碳载量≤15％、且比表面积≥450m2/g的谱柱，待测样品溶液的溶剂为乙腈。
[0008]在一个实施例中，所述谱条件还包括：流动相采用磷酸溶液和乙腈的混合溶液，且所述磷酸溶液与乙腈的体积比为(65-55):(35-45)。
[0009]在一个实施例中，所述磷酸溶液与乙腈的体积比为60:40。
[0010]在一个实施例中，所述磷酸溶液中磷酸的体积百分比为0.08％-0.12％。[0011]在一个实施例中，所述流动相的流速为0.8-1.2ml/min。
[0012]在一个实施例中，所述谱柱包括GL sciences Inertsil ODS-3C18谱柱。[0013]在一个实施例中，所述谱柱的柱温为25℃-35℃。
[0014]在一个实施例中，所述检测方法中的检测器检测波长为216nm。
[0015]在一个实施例中，所述基因毒性杂质包括苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯中的至少一种。
[0016]在一个实施例中，所述检测方法包括如下步骤：
[0017]将苯磺贝他斯汀样品溶解在乙腈中，得到供试品溶液；
[0018]将苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯对照品溶解在乙腈中，得到对照品溶
液；
[0019]将所述供试品溶液和对照品溶液注入液相谱仪中，采用所述谱条件进行检测。
[0020]本发明提供的苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法采用高效液相谱测定，该高效液相谱为反相液相谱，其中采用特定碳载量(≤15％)及比表面积(≥450m2/g)的谱柱，可以降低溶剂效应，从而减少由于溶剂效应导致的谱峰异常现象；而待测样品溶液的溶剂为乙腈，乙腈对苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质类具有很好的稳定性，室温放置48h内稳定，这样便于进行样品中杂质的检测；因此，该检测方法对苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质具有很好的分离效果，且灵敏度高，稳定性好，具有很好的实用性。
附图说明
[0021]图1为本发明实施例中苯磺贝他斯汀与杂质的混合溶液的高效液相谱图；横坐标上方，从右到左的峰值依次为：苯磺酸异丙酯(IPBS)、苯磺酸乙酯(EBS)、苯磺酸甲酯(MBS)、苯磺贝他斯汀(Bepotastine besilate)；
[0022]图2本发明实施例中为苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯与苯磺酸异丙酯的检测限图谱；[0023]图3本发明实施例中三种不同谱柱下苯磺酸异丙酯溶液的对比图；横坐标上方，从上到下的三条曲线依次对应为：
Waters Symmetry C18 4.6*250mm，5μm；Waters Spherisorb ODS2 C18 4.6*250mm，5μm；GL sciences Inertsil ODS3C18 4.6*250mm，5μm。
具体实施方式
[0024]为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0025]本发明实施例提供了一种苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法，所述检测方法采用高效液相谱测定，所述高效液相谱为反相液相谱，谱条件包括：采用碳载量≤15％、且比表面积≥450m2/g的谱柱，待测样品溶液的溶剂为乙腈。
[0026]苯磺贝他斯汀(Bepotastine besilate)中基因毒性杂质为苯磺酸酯类的基因毒性杂质，具体地，所述基因毒性杂质包括苯磺酸甲酯(Methyl benzenesulfonate，MBS)、苯磺酸乙酯(Ethyl benzenesulfonate，EBS)和苯磺酸异丙酯(Isopropyl bensene sulfonate，IPBS)中的至少一种。苯磺酸酯类杂质在乙腈-水溶液中进行酯的酸水解反应导致其杂质不稳定。原因在于酯在酸催化时，羧基氧原子先质子化，使羧基碳的正电性增强，接受亲核试剂进攻的能力变强，水分子向羧基碳进攻，通过加成-消除而形成羧酸和醇；酯的酸性水解反应机理如下：
[0027]
[0028]乙腈中无亲核试剂的参与反应，因此采用纯乙腈作为溶剂可提高苯磺酸酯类杂质的稳定性。然而当用纯乙腈作为溶剂，在反相液相谱中，容易产生峰的变形及柱效的降低，主要原因在于样品溶剂与流动相的洗脱强度有差异，且乙腈的洗脱能力较强。对此，可以使用流动相为溶剂溶解样品解决该问题；但是苯磺酸异丙酯在乙腈水溶液不稳定，在乙腈溶液中稳定，故不适用；因此，申请人通过研究发现，降低谱柱的含碳量，即采用特定碳载量(≤15％)及比表面积(≥450m2/g)的谱柱，可以减少谱系统的传质效应，从而降低溶剂损耗，增加样品的负载量，改善样品的峰型。
[0029]因此，本发明实施例采用反相液相谱对苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质进行检测，采用特有的碳
载量(≤15％)及比表面积(≥450m2/g)的谱柱，可以降低溶剂效应，从而减少由于溶剂效应导致的谱峰异常现象；而待测样品溶液的溶剂为乙腈，乙腈对苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质类具有很好的稳定性，室温放置48h内稳定，这样便于进行样品中杂质的检测；因此，该检测方法对苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质具有很好的分离效果，且灵敏度高，稳定性好，具有很好的实用性。
[0030]具体地，对于谱柱，碳载量≤15％，如碳载量在8％-15％之间；比表面积≥450m2/g，如比表面积在450m2/g-600m2/g之间。
[0031]在一个实施例中，所述谱柱包括GL sciences Inertsil ODS-3C18谱柱。采用碳载量≤15％、且比表面积≥450m2/g的谱柱，可以降低溶剂效应，GLsciences Inertsil ODS-3C18谱柱的碳载量为15％且比表面积为450m2/g，可以减少由于溶剂效应导致的谱峰异常现象。进一步地，所述谱柱的柱温为25℃-35℃。
[0032]在一个实施例中，所述谱条件还包括：流动相采用磷酸溶液和乙腈的混合溶液，且所述磷酸溶液与乙腈的体积比为(65-55):(35-45)。用上述流动相对苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质具有很好的洗脱效果。进一步地，所述磷酸溶液与乙腈的体积比为60:40。更进一步地，所述磷酸溶液中磷酸的体积百分比为0.08％-0.12％。
[0033]在一个实施例中，所述流动相的流速为0.8-1.2ml/min。上述流速范围内对对苯磺贝他斯汀中基因
毒性杂质具有很好的分离效果。
[0034]在一个实施例中，所述检测方法中的检测器检测波长为216nm。
[0035]具体地，本发明实施例的苯磺贝他斯汀中基因毒性杂质的检测方法包括如下步骤：
[0036]S01：将苯磺贝他斯汀样品溶解在乙腈中，得到供试品溶液；
[0037]S02：将苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯对照品溶解在乙腈中，得到对照品溶液；
[0038]S03：将所述供试品溶液和对照品溶液注入液相谱仪中，采用所述谱条件进行