过氧化物酶活性的测定
仪器药品
721型分光光度计、离心机、秒表、天平、研钵、磁力搅拌器、20mmol/LKH2PO4、愈创木酚、30%过氧化氢、100mmol/L磷酸缓冲液（PH6.0）
操作步骤
1．称取植物材料1g，加20mmol/LKH2PO45ml，于研钵中研磨成匀浆，以4000r/min离心15分钟，倾出上清夜保存在冷处，残渣在用KH2PO4溶液提取一次，合并两次上清夜，处于冷处备用。2．取光径1cm比杯2只，于1只中加入反应混合液3ml，KH2PO41ml，作为校零对照，另1只中加入反应混合液3ml，上述酶液1ml，立即开启秒表记录时间，于分光光度计上测量吸光度值，每隔1分钟读数一次，读数于波长470nm下进行。
3．以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以Δ 鲜重表示之。
4．植物样品中过氧化物酶活性的测定：采用粗天平称取剪碎、混匀的植株叶片1g，于研钵中加入少许蒸馏水及约0.2gCaCO3，研磨成匀浆状.转移全部匀浆至100mL容量瓶中并补充体积至刻度，摇匀.取25mL悬浮液注入50mL量瓶中，用10%硝酸钙溶液稀释至刻
度，摇匀，在定期摇动下浸泡30-40min.经过滤后，采用愈创木酚法测定过氧化物酶活性[4].
叶面积测量法
单叶表面积的估算采用坐标纸描绘法，即先随意挑取48片叶描绘在坐标纸上，计算出面积，然后以长(ａ)×宽(ｂ)为变量，叶面积为依变量进行线性回归，方程式为:ｙ=0.87ａｂ-0.21 ｒ2=0.98。单叶面积依此公式将叶长、叶宽换算而得。特殊叶面积为单叶面积与单叶重量的比值。单株总叶面积为叶重和特殊叶面积的乘积。叶面积率为单株总叶面积与植株总重的比值。
根形态测定法
1)菜豆试验.采用分层式磷控释砂培试验。将钒土(A1203，过2848目)以1.5%的比例与石英砂混匀后放于25 L的塑料盆中.种植前，用一定浓度的KHZPO；浸泡钒土与石英砂混合物，利用钒土能有效吸附磷并能缓慢、均匀释放有效磷的特性，控制栽培介质对有效磷的供应仁’“].从钒土与石英砂的混合物表面开始，每隔5 cm放人一层孔径为2 mm的玻璃纤维筛网(主根、基根均能顺利穿透)，每盆分为4层，
每层厚度为5 cm，最后一层为15 cm.本试验共设2个磷处理，1)低磷(0.2 gmol/L P); 2)高磷(27 gmol/LP).除磷以外的其他养分的含量为(化合物gmol/L):
叶绿素含量测定：
80％的丙酮液的配制：4L丙酮+ 1L蒸馏水。
称0.5g左右的叶片放在50ml的离心管（做三个重复），加入25ml浓度为80％的丙酮液，放在黑暗处浸提大约36小时后取出，稀释4倍后分别在波长663nm、645nm、652nm和470nm 下测定光密度，以80％的丙酮液为空白。（参考陈建勋，王晓峰主编的《植物生理学实验指导》,P35～36）
也可用95%乙醇溶液，在665、649、470nm处有最大吸收峰
Ca=13.95D665-6.8649
Cb=24.96D649-7.32D665
Cx.c=(1000D470-2.05Ca-114Cb)/245
2 抗氧化酶活性的定：（2.5g样）
0.05mol/L磷酸缓冲溶液(PBS)（pH=7.8）溶液的配制：65.5506g Na2HPO4·12H2O + 2.65285g NaH2PO4·2H2O, 定容到4L。（参考陈建勋，王晓峰主编的《植物生理学实验指导》，P134）。
取低温保存的鲜样，称2g左右的叶片（或根）放在50ml的离心管，加入20ml浓度为0.05mol/L 磷酸缓冲溶液（pH=7.8）（最好是较冷的磷酸缓冲溶液，防止研磨时温度过高使酶失活），研磨（用磨碎机磨），8000r/min的冷冻离心机下离心20分钟，上清液为粗酶液。
2.1丙二醛（MDA）的测定：
20％三（TCA）溶液的配制：称200g三，用蒸馏水定容到1000ml。（参考陈建勋，王晓峰主编的《植物生理学实验指导》,P124）；
poema0.5% 硫代酸（TBA）溶液的配制：称5g硫代酸（TBA），用20％三（TCA）溶液溶解并定容到1000ml。（参考陈建勋，王晓峰主编的《植物生理学实验指导》,P124）（先加少量的氢氧化钠1mol/L溶解）；
0.5ml酶液（对照用0.5ml的0.05mol/L pH=7.8的磷酸缓冲液代替酶液）（做三个重复）+ 3mlTBA――振荡――沸水浴上反应30min――冷却（至少30min）――比（OD600、OD532、OD450）。（参考陈建勋，王晓峰主编的《植物生理学实验指导》，P124）
2.2超氧化物歧化酶（SOD）的测定：
NBT(400ml)混合反应液br />
392mlPBS(Ph=7.8),+0.0206g NBT+ 0.776g甲硫酸铵+8ml核黄素溶液+0.4ml EDTA-Na溶液
（100mlPBS缓冲溶液中含0.01204g核黄素）。
（另配）100ml PBS溶液加EDTA-Na 3.7224gEDTA-Na
测试时：取3ml反应液+0.05ml(根)或0.02 ml(叶)粗酶液，于光照培养箱中6-10分钟，OD650下测定吸光度。
2.3过氧化物酶（POD）的测定：
0.05mol/L磷酸缓冲溶液(PBS)（pH=7.0）溶液的配制：10.9251g Na2HPO4·12H2O + 3.042975g NaH2PO4·2H2O，定容到1000ml。
0.3%H2O2溶液的配制：吸2.5ml 30%H2O2，用0.05mol/L pH=7.0磷酸缓冲溶液(PBS)定容到250ml。
0.2%愈创木酚溶液的配制：称0.5g愈创木酚，用0.05mol/L pH=7.0磷酸缓冲溶液(PBS)定容到250ml。
2ml 0.3%H2O2溶液+ 0.95ml 0.2%愈创木酚溶液+ 1ml 0.05mol/L pH=7.0磷酸缓冲溶液(PBS) + 0.02ml？？（原来为0.01）酶液（根加0.05ml酶液）（对照用0.05mol/L磷酸缓冲溶液代替酶液）（做三个重复），记录470nm处OD降低速度。将每分钟OD增加0.01定义为1个活力单位。（参考陈建勋，王晓峰主编的《植物生理学实验指导》P121）
pokarekare ana比时加酶液，混合后即刻计时。
2.4 脯氨酸的测定
标准曲线的制作：
编号
1
2
3
4
5
6
7
标准脯氨酸的量（ml）
0.1
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
H2O（ml）
1.0
0.9
0.8bailu
0.6
0.4
0.2
冰乙酸（ml）
2
2
2
2
2
2
2
显液（ml）
3
3
3
3
3
3
3
脯氨酸含量（μl）
1
2
4
6
8
10
0.5ml酶液（对照用0.5ml 80％乙醇代替）（做三个重复）+ 1ml冰乙酸+ 1.5ml显液―――混匀，沸水浴15min，冷却后测OD520。
2.5可溶性蛋白的测定（参考赵志杰，史国安，董新纯编的《植物生理学实验指导》）
牛血清白蛋白：配成100μg/ml和1000μg/ml。
90％乙醇：90ml乙醇+ 10ml蒸馏水。？？？
85％（W/V）磷酸：170ml磷酸+ 30ml蒸馏水。
考马斯亮蓝G-250：称0.2g考马斯亮蓝G-250溶于100ml 90％乙醇中，加入85％（W/V）磷酸200ml，用蒸馏水定容到2L。常温下可保存一个月。
标准曲线的制作：
天使的侧脸配制0～100μg/ml血清白蛋白血液
管号
1
2
3
4
5
6
100μg/ml牛血清白蛋白(ml)
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
蒸馏水量(ml)
1.0
0.8
0.6
0.4
风云必胜主题曲
0.2
李若彤年龄多大蛋白质含量（ml）
0.02
0.04
0.06
0.08
0.10
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