作者简介：陈嘉，女，正攻读基础兽医专业的硕士学位。*通讯作者(Correspondent author)
不同产地雪莲花中多糖的含量测定
陈 嘉，黄雅杰，张 琦
*
(西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都610041)
摘要：目的 测定不同产地雪莲花中多糖的含量。方法 采用蒽酮-硫酸比法测定相对单糖含量，利用单糖和多糖的换算因子计算多糖含量；测定波长620nm 。结果 线性范围为0.01~0.06mg  ml -1(r =0.9994)，平均加样回收率为100.08%,RSD =4.15%。结论 所用方法快速、准确、灵敏。测得5种不同产地雪莲花中多糖含量为14.5%~22.3%。关键词：雪莲花；多糖；蒽酮-硫酸比法；含量测定中图分类号:R917文献标识码:A
文章编号:1006-0103(2006)03-0268-02
Determination of polysaccharides in Snow Lotuses
CHEN Jia,HUANG Ya-jie,ZHANG Qi *
(South west N ationalitive University ,Chengdu 610041,China)
Abstract:OBJECTIV E  To determine polysaccharides in Snow Lotuses.METHODS  The polysaccharides content was determined with An  throne-sulfuric acid colorimetry.The detectve wavelength was 620n m.RESULTS  The linearity was in the range of 0.01-0.06mg  ml -1(r =0.9994).The average recovery rate was 100.08%wi th RSD of 4.15%.C ONC LUSION  The method is rapid,reliable and sensitive.The 5samples of Snow Lotuses which bought from di fferent areas in China were assayed and the contents of polysacckarides varied from 14.5%to 22.3%.
Key words:Snow Lotuses;Polysaccharides;Anthrone-sulfuric acid colorimetry;Assay CLC number:R917Document code:A Article ID:1006-0103(2006)03-0268-02
雪莲花又名雪莲，属于菊科风毛菊属Saussurea 雪兔子亚属Subgen Eriocoryne 植物，作为药材使用的品种有产于西藏等地的三指雪兔子S.tridactyla Sch.- Hook.f.；产于四川、云南等地的绵头雪兔子S.lanice p Hand.-Mazz；产于甘肃、青海等地的水母雪莲S.medusa Maxim；产于新疆的天山雪莲S. Kir.、鼠曲雪兔子S.gnaphalders
Sch.-Bip.等[1]
。
雪莲多生长在海拔4km 以上的高山石滩上，是高山地区的民间药用植物，具有散寒除湿、活血通经、抗炎镇痛等功效，用于风湿性关节炎、妇科病等。所含成分除黄酮类化合物、萜类及其衍生物、甾体类化合物外，还有糖和苷类化合物等。关于雪莲花总黄酮含量测定已有报道[2]。现采用比法测定不同产地(或品种)雪莲花中多糖的含量。
1 实验部分
1.1 仪器、试剂和试药
721型分光光度计(上海分析仪器厂);C ARY 50型紫外分光光度计(Varian 公司)。乙醇、丙酮、乙醚、蒽酮、硫酸、葡萄糖均为分析纯，水为双蒸水。雪莲花(市售)经四川省药品检验所黎跃成主任药师鉴定为水母雪莲花和绵头雪莲花，品种及来源见表3。1.2 方法与结果
1.2.1 多糖的提取与纯化 准确称取雪莲花干品(用烘干法测定药材水分为12.25%)100.0g，加15
倍量的水煎煮(1 5h  3)，合并煎液，过滤，滤液静置12h 。取上清液浓缩至1 2(药材 药液)，加乙醇至含醇量为80%，搅拌，静置24h 。沉淀物转移至圆底烧瓶中，分别以无水乙醇、丙酮、乙醚回流洗涤，得灰白粗多糖粉末。将粗多糖溶于水，用Sevag 法除去蛋白质,0.5%活性炭脱。上清液装入透析袋(分子量3 5kD)透析3d，前两天用自来水透析，第3天用蒸馏水透析，换水4次。透析液浓缩，加乙醇至醇含
量为80%，静置24h 。所得沉淀物用无水乙醇洗涤，抽滤,60 烘干，得白粉末状雪莲多糖。雪莲多糖溶于水，与茚三酮反应呈阴性，与碘反应不显蓝，说明不含蛋白质和淀粉。紫外扫描图谱在200nm 有最大吸收，在280nm 和260nm 无蛋白和核酸吸收峰，亦未见其他杂质吸收峰。
1.2.2 溶液的配制 精密称取105 干燥至恒重的葡萄糖0.1004g，以蒸馏水溶解，定容至100ml 量瓶
中，即得1.004mg  ml -1
的葡萄糖标准溶液。取60 干燥至恒重的雪莲花多糖0.5g，于100ml 量瓶中，精密称定，加少量蒸馏水溶解，定容，得雪莲多糖供试液。称取0.2g 蒽酮，加100ml 浓硫酸，混合摇匀即得蒽酮溶液(临用配)[3]。取雪莲花细末0.5g，精密称定，置圆底烧瓶中，以80%乙醇20ml 回流提取1h，趁热过滤，残渣用80%热乙醇洗涤2次，挥干乙醇。残渣连同滤纸置圆底烧瓶中，以40ml 蒸馏水加热回流提取1h，趁热过滤，重复操作1次，残渣用
华西药学杂志
W C J  P S  2006,21(3):268~269
热水洗涤2次，洗液并入滤液中，放冷后，定容至100 ml量瓶中，即得样品溶液。
1.2.3 标准曲线的制备 分别量取葡萄糖标准溶液0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60ml于10ml量瓶中，蒸馏水定容，摇匀。分别精密吸取2ml上述溶液于10ml具塞试管中，以2ml蒸馏水作空白，各自加入4ml蒽酮试剂，立即混匀，置沸水浴中加热10min，迅速冷却至室温，于620nm测定吸光度。以吸光度对葡萄糖浓度做线性回归，回归方程为:C= 7 73 10-2A+4 10-4(r=0.9994)。表明葡萄糖在0.01~0.06mg ml-1范围内与吸光度呈良好的线性关系。
1.2.4 换算因子的测定 取 1.2.2 项下的雪莲多糖供试液，分别精密吸取2ml于10ml具塞试管中，加4.0ml蒽酮试液，摇匀。按 1.2.3 项下操作，测定吸光度，计算5份平行样品中葡萄糖含量和平均值。再计算换算因子,f=W/C D=7.43(RSD= 2.68%,n=5)。式中f为换算因子,W为多糖质量(mg),C为多糖溶液中葡萄糖质量(mg),D为多糖的稀释倍数。
1.2.5 稳定性试验 取 1.2.2 项中样品溶液，按 1.2.3 项下操作，每隔5min，连续30min测定吸光度。平均吸光度为0.637,R SD=0.08%(n=7)，表明稳定性良好。再每隔1h，连续6h内测定吸光度。结果平均吸光度为0.574,RSD=0.83%(n= 6)，表明样品溶液6h内较稳定。
1.2.6 精密度试验 取雪莲花多糖供试液，按 1.
2.3 项下重复测定同一样品吸光度5次。结果吸光度的R SD=0.09%，表明仪器精密度良好。
1.2.7 重复性试验 取同一样品平行操作5份，按 1.2.2 项制备溶液。按 1.2.3 项下测吸光度。计算雪莲花多糖的含量，结果平均含量为17.31%, RSD=1.64%(n=5)，表明方法重复性良好。
1.2.8 加热时间的选择 取同一雪莲花样品3份，按 1.2.2 项制备样品溶液，测定吸光度，结果表明加热时间在15min时，有较大吸光度且稳定。
1.2.9 加样回收率的测定 精密称定样品粉末0.2g，加入一定量葡萄糖溶液，按 1.2.2 项下方法制备溶液，测定吸光度。平均回收率为100.08%, RSD=4.15%(表1)。
1.2.10 样品的测定 分别取不同产地的雪莲花0.5g，精密称定，同一样品平行操作3份，按 1.2.2 项下方法制备溶液，测定吸光度，求供试液中相对葡萄糖的含量，并计算样品中多糖含量(表2)。多糖含量=C Df/W 100%。式中C为供试液中葡萄糖含量(mg),D为供试液的稀释因子,f为换算因子,W 为样品的重量。实验结果表明：不同产地和品种的雪莲花中多糖的含量不同，其中甘肃冰山的含量最高，云南丽江的最低。
表1 加样回收率的实验结果(mg,n=5)
Tab le1 The results of recovery test(mg,n=5)
Origi nal Added Detected Rec overy/%X/%RSD/%
4.761  4.0168.933103.90100.08  4.15
5.208  4.0169.386104.00
4.704  4.0168.888104.20
4.611  4.0168.49496.70
4.544  4.0168.40296.10
表2 不同产地雪莲花中多糖的含量
Tab le2 Crude drugs and their origin and the results of determination of total polysaccharides in Saussu rea
Scie ntifi c na me of sa mple Habit at Contents/%X/%RSD/%
S.lanicep Hand.-Mazz Yunnan Liji ang14.9313.7614.7614.54  4.47
2 讨论
我们先以80%乙醇回流提取除去小分子糖类、心中的雪莲花
苷类和生物碱等干扰成分，再用水回流提取多糖，以
蒽酮-硫酸比法测定多糖含量。所用方法简单、
易行，重复性良好，灵敏度高，显稳定，但所用显
剂宜临用时现配。制备样品溶液时，对雪莲的残渣
再重复一次提取操作，所得溶液以硫酸-蒽酮法检
测，溶液不显黄绿，说明前两次提取已将雪莲中多
糖提尽，证明样品溶液的制备方法合理可行。
在多糖的含量测定中，尤其当多糖组成复杂时,
因较难得到相应多糖对照品，多采用葡萄糖代替对照品，测定样品中多糖的相对含量。文中以比法测定样品中的单糖，通过单糖和多糖的换算因子计算药材中的多糖。蒽酮-硫酸比法能有效测定多糖含量，但影响因素较多。照文献[4]确定了测定波长及显剂的用量，同时考察了加热时间和显剂的稳定性。不同来源和产地的雪莲花多糖含量不同，同种水母雪莲花以甘肃冰山出产者含量最高，四川阿坝、四川雅安和四川雅安宝兴出产者差异不大，云南丽江产的绵头雪莲含量最低。同品种雪莲因产地不同其多糖含量也有较大差异。提示进行雪莲产品开发研究时，应确定品种和产地。
参考文献:
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收稿日期:2005-12
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第3期陈 嘉，等。不同产地雪莲花中多糖的含量测定